粪链球菌

1.大肠菌群介绍:
粪肠球菌根据最新的分类原则,又称粪肠球菌。用C多糖抗原根据兰斯菲尔德血清学分型可将链球菌分为许多群。粪链球菌属于d群
粪肠球菌是一种革兰氏阳性、过氧化氢阴性的球菌,是人和动物肠道的主要菌群之一。它能产生天然抗生素,有益于人体健康。同时还能产生细菌素等抑菌物质,抑制大肠杆菌、沙门氏菌等致病菌的生长,改善肠道微环境;还能抑制肠道中产尿素酶细菌和腐败菌的繁殖,降低肠道中尿素酶和内毒素的含量,降低血液中氨和内毒素的含量。

粪肠球菌作为一种益生菌,已广泛应用于医药和食品工程领域。另外,肠球菌是一种正常存在于消化道中的微生物,在肠黏膜中具有很强的耐受和定植能力,是一种兼性厌氧乳酸菌。与厌氧双歧杆菌相比,更适合生产应用。

二、参考标准:

GB8538-2016《饮用天然矿泉水:粪链球菌的检验》

三。检验原则:

采用滤膜法,用孔径为0.45μm的滤膜过滤250mL水样,滤膜转移到KF链球菌琼脂培养基上,在36℃±1℃的恒温箱中培养48h。若有红色或粉红色菌落生长,应接种于脑心浸提琼脂培养基上做进一步确认试验。如果过氧化氢酶反应为阴性,在45℃的脑心浸提琼脂培养基上培养后可产生菌落。

四。检验方法及结果分析:

粪链球菌的检验程序见图1。

粪链球菌

图1 粪链球菌检验程序图1粪链球菌检验程序

4.1推测试验:
4.1.1水样过滤:
水样的稀释倍数应根据水质污染情况确定,使一张无菌滤膜过滤后能产生20~100个菌落,每张滤膜过滤250mL水样或稀释液。
过滤操作应在100级的洁净工作台上进行。首先用无菌镊子夹住已灭菌的滤膜边缘,将粗糙面朝上放在已灭菌的滤床上,固定好过滤器。过滤后,滤膜应直接转移到KF链球菌琼脂培养基上,同时避免滤膜与培养基之间产生气泡。
KF链球菌琼脂原理:蛋白胨和酵母粉提供氮源、维生素和生长因子;麦芽糖和乳糖是可发酵的糖;氯化钠维持平衡的渗透压;叠氮化钠能抑制革兰氏阴性菌;琼脂是培养基的凝固剂;溴甲酚紫作为指示染料;粪链球菌可将氯化三苯基四唑还原为酸性偶氮染料,表现为深红色菌落。

用法:称取本品69.4克,加热溶解于1000毫升蒸馏水中,煮沸至完全溶解,待冷却至50-60℃时,加入10毫升无菌1% TTC溶液,混匀,倒入无菌盘中备用。

文化:

将培养皿倒置,在36℃±1℃培养48小时。

4.1.3计数:

粪链球菌菌落在滤膜上呈大小不一的红色或粉红色菌落。挑选不少于5个可疑菌落(如果少于5个,则全部挑选)进行革兰氏染色。显微镜下,粪链球菌应该是革兰氏阳性球菌,常呈短链排列。根据菌落特征的一致性,统计每250mL水样中的典型菌落数。

将粪链球菌接种于KF链球菌琼脂平板,培养结果如下图所示:

4.2验证试验:
4.2.1从滤膜上挑取典型菌落,接种于脑心浸提琼脂培养基斜面上,36℃±1℃培养24h~48h。如果有菌落生长,继续进行4.2.2和4.2.3的步骤。

将粪链球菌接种于脑心浸提琼脂培养基斜面上,培养结果如下图所示:

4.2.2从带接种环的脑心浸提琼脂培养基斜面上挑取典型培养物至干净的载玻片上,在载玻片上的涂片涂层上滴加几滴新鲜配制的3%双氧水。如果没有气泡出现,则过氧化氢酶反应为阴性,可认为该菌落为疑似粪链球菌,应继续进行以下确认过程。如果出现气泡,则过氧化氢酶反应为阳性,所以菌落不属于粪链球菌,可以确定检测可以到此为止。

4.2.3将一环培养物从脑心浸提琼脂培养基转移到有接种环的脑心浸提液体培养基中,45℃培养48 h..此外,还将一环培养物转移到胆汁液体培养基中,在36℃±1℃培养3 d。胆汁液体培养基是在60 mL无菌脑心液体培养基中加入40 mL无菌100 g/L牛胆汁盐溶液制成的。

将粪链球菌接种到脑心液体培养基和胆汁液体培养基中,培养结果如下图所示:

4.2.4转入上述培养基后,如能生长繁殖,结果呈阳性,确认为粪链球菌。

4.3结果和报告:

根据上述典型菌落计数(4.1.3)和确证试验阳性结果(4.2),计算每250mL水样中粪链球菌的数量,结果计算为CFU/250mL。

GB 8538-2016饮用天然矿泉水试验方法标准下载

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